问题标题：
引物上下游退火温度相差太多,如何选择退火温度呢?比如satt427的上游温度为65.15,而下游为57.26.而且引物是的退火温度是不是上下游的温度的平均值然后减去5度以内的温度?
问题描述：
引物上下游退火温度相差太多,如何选择退火温度呢?比如satt427的上游温度为65.15,而下游为57.26.
而且引物是的退火温度是不是上下游的温度的平均值然后减去5度以内的温度?
秦春节回答：
你设计的引物退火温度相差并不是太多的啊,我们一般将上下游引物退火温度平均值加2度作为退火温度,如果你不放心可以做个梯度PCR,一般可以筛选出相对较好的退火温度.如果还是没P出来可以用TouchDownPCR试试
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