严格的无菌操作：采取待检材料时的无菌操作,不论任何待检材料,必须在无菌操作下,用灭菌的器械采取,样品放入灭菌的容器中待检. 　　接种培养基时的无菌操作：接种用的器械如接种环、棉棒或其他用具,在取材接种之前必须予以灭菌,接种培养基时,要尽一切可能防止外界微生物的进入. 　　创造适合细菌生长发育的条件：选择适宜的培养基,如果培养基选择不当,则材料中的细菌就可能难以分离.为此,再从待检材料中进行性质不明的细菌初次分离培养时,一般尽可能地多用几种培养基,包括普通培养基和特殊培养基（如含有特殊营养物质的培养基,适于厌氧菌生长的培养基等） 　　考虑细菌所需的大气条件：对于性质不明的细菌材料最好多接几种培养基,分别放在普通大气,无氧环境内或含有5%-10%二氧化碳的容器中培养. 　　要考虑培养温度和时间：一般病原菌放在35-37℃温度培养即可,24-48小时培养后大多数病原菌都可以生长出来.少数菌须培养较长时间(1-2周)后,可见其生长.