马里奥•卡佩基等科学家在胚胎干细胞和哺乳动物DNA重组方面的研究中取得一系列突破性发现，这些发现导致了“基因敲除”技术（通常叫基因打靶）的出现，利用这一技术可以准确地“敲除”DNA分子上的特定基因，该技术的过程大致如下：

第一步：分离胚胎干细胞．从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞，在培养基中扩增．这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”．

第二步：突变DNA的体外构建．获取与靶基因同源的DNA片断，利用基因工程技术在该DNA片段上插入neoR基因（新霉素抗性基因），使该片段上的靶基因失活．

第三步：突变DNA与靶基因互换．将体外构建的突变DNA转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造．

第四步：将第三步处理后的胚胎干细胞，转移到特定培养基中筛选培养．

其基本原理如图所示：

请根据上述资料，回答下列问题．

（1）第一步从小鼠囊胚中分离___细胞，再用胰蛋白酶处理后，可得到分散的胚胎干细胞．

（2）第二步中neoR基因插入靶基因使用的工具酶是___．

（3）第四步的特定培养基中必须加入的物质是___．

（4）研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，若将该细胞培育成基因敲除小鼠，运用到的生物技术有___（写出2种生物技术）．

（5）科学家可以通过敲除基因来研究基因的功能，第（4）题中获得的基因敲除小鼠，能否直接用来研究基因的功能？为什么？___．

（6）若利用第（4）题中获得的基因敲除小鼠和非基因敲除小鼠交配，其产生的后代F1中的基因敲除小鼠再和原基因敲除小鼠 交配产生F2代，其中纯合的基因敲除小鼠所占比例___．