提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法 　　提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行 　　SDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离 　　CATB是一种抽提液,破坏细胞膜的~具体忘了~ 　　DNA不溶于异丙醇,异丙醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了 　　以下是一些具体方法,希望有用 　　基因组DNA提取方法 　　制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb.在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础.主要是CTAB方法,其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法.2化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法3生物方式:酶法.根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等 　　试验步骤： 　　1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集. 　　2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集.试验步骤2再重新作一边. 　　3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀. 　　4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h, 　　5、用等体积的酚抽提一次,2500rpm离心收集水相,用等体积的（酚,氯仿,异戊醇）混合物抽提一次,2500r/min离心收集水相 　　6、用等体积的氯仿,异戊醇抽提一次.加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀,冰浴,10min.. 　　7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中.加入等体积的异丙醇.室温10min. 　　2500rpm,离心10min.弃上清. 　　8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇.-20℃20min. 　　9、12000r/min,室温离心5min.弃上清.将DNA溶于适量TE中. 　　外周血DNA提取技术 　　分离外周血白细胞提取方法： 　　试验步骤： 　　1、取人肘静脉血5ml,EDTA抗凝,2500rpm离心10min. 　　2、小心吸取上层血浆,分装到3个0.5ml离心管中. 　　3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液,摇匀,冰浴15min. 　　4、2500rpm离心10min,弃上清. 　　5、加入10ml溶血液,摇匀,冰浴15min. 　　6、3000rpm离心10min,弃上清. 　　7、倒置离心管,去掉残液. 　　8、得白细胞,－80?C冻存. 　　试验要求： 　　血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h,4℃放置不超过5h,以防白细胞自溶. 　　氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA： 　　试验试剂： 　　Ligsisbuffer： 　　133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml,高压灭菌. 　　ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml,高压灭菌. 　　提取缓冲液（Extractionbuffer）： 　　10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml,高压灭菌 　　试验步骤： 　　1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl,充分颠混至清亮.以4000rpm,离心5min.弃上清液. 　　2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl,充分匀浆.以6000rpm,离心5min. 　　3、彻底弃去上清,加入extractionbuffer500μl（裂解细胞）,混匀置于37℃,水溶1h. 　　4、加入8μl的蛋白酶K,颠混,37℃过夜（或55℃,3h,但是37℃效果要好些）. 　　5、每管加入450μl饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min,以5500rpm,离心15min. 　　6、取上清,每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿－异戊醇,摇匀10min,以5500rpm,离心15min. 　　7、取上清,每管加入500μl氯仿－异戊醇,摇匀10min,以5500rpm,离心15min. 　　8、取上清,每管加50μl的3M的NaAC＋,适量无水乙醇（预冷）至满,摇匀放入-20℃保存2h以上. 　　9、以12000rpm,离心20min.去上清,加入70％乙醇500μl,以12000rpm,离心5min,去上清,50－60℃干燥. 　　10、加入50μl灭菌去离子水,转弹,混匀. 　　NaI提取法提取外周血白细胞基因组： 　　实验步骤： 　　1、取外周抗凝血（全血）100ul于eppendorf管中,12000rpm离心12min. 　　2、弃上清,加双蒸水200ul溶解,摇匀20s. 　　3、混匀后加6MNaI溶液200ul,摇匀20s. 　　4、加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul,边加边摇,摇匀20s,12000rpm离心12min. 　　5、取上层液350ul,加入另一新eppendorf管中,加0.6倍体积异丙醇,摇匀20s,室温放置15min,静置后的反应体系15000rpm离心12min,使沉淀紧贴eppendorf管壁. 　　6、弃异丙醇,加70％乙醇1ml（不振动）,以15000rpm离心12min. 　　7、弃乙醇,敞开eppendorf管盖,烘干（37℃恒温箱）后,加1xTE溶液30ul,溶解DNA＞12h以上,制成的DNA液-20℃冰箱保存备用. 　　常用的外周血白细胞基因提取方法： 　　试验原理： 　　苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂,反复抽提,使蛋白质变性,SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解,在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子,核蛋白变性降解,使DNA从核蛋白中游离出来.DNA易溶于水,不溶于有机溶剂.