科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高．图一是转基因抗冻番茄培育过程的示意图，图二为质粒限制酶酶切图谱．鱼的抗冻蛋白基因不含图中限制酶识别序列，Ampr为抗氨苄青霉素基因，其中①-④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：

（1）为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的___之后．图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的___过程．

（2）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割．在此实例中，应该选用___限制酶切割．

（3）要利用培养基筛选出已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有___作为标记基因．

（4）研究人员通常采用___法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内．