如果用普通PCR检测不到条带是因为扩增模板量太低造成的,为了提高检测灵敏度和特异性,可以采用巢式PCR.其优点是： 　　1、克服了单次扩增平台期效应的限制,使扩增倍数提高,从而极大的提高了PCR的敏感性； 　　2、由于模板和引物的改变,降低了非特异性反应连续放大进行的可能性,保证了反应的特异性； 　　3、内侧引物扩增的模板是外侧引物扩增的产物,第二阶段反应能否进行,也是对第一阶段反应正确性的鉴定,因引可以保证整个反应的准确性及可行性. 　　但其亦有缺点： 　　进行第二次PCR坟增引起交叉污染的几率大.为了克服此缺点,可彩用同一反应管中巢式PCR,主要利用内外引物Tm值不同. 　　如果你已排除引物,酶,RNA提取,逆转录等等其他原因引起的PCR不成功,确定关键原因是模板量低的话,可以用巢式.但还是建议先排除一下其他可能因素,毕竟普通PCR简单.