问题标题:
TaqDNA聚合酶是从一种嗜热细菌中分离提取的,该菌是1966年从美国黄石国家森林公园的一个热泉中发现的。实验表明,PCR反应时变性温度为95℃,50个循环后,TaqDNA聚合酶仍有65%的活性
问题描述:
TaqDNA聚合酶是从一种嗜热细菌中分离提取的,该菌是1966年从美国黄石国家森林公园的一个热泉中发现的。实验表明,PCR反应时变性温度为95℃,50个循环后,TaqDNA聚合酶仍有65%的活性。TaqDNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR的前提条件,也是PCR技术能迅速发展和广泛应用的原因。TaqDNA聚合酶还具有逆转灵活性,其作用类似于逆转录酶。TaqDNA聚合酶表现为Mg2+依赖,该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感。测定结果为MgCl2浓度在2.0mmol/L时该酶催化活性最高,此浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性,Mg2+过高就抑制酶活性,因而MgCl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整,优化浓度。TaqDNA聚合酶具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性,而无3′→5′外切酶活性,它不具有校对活性。因而在PCR中如发生某些碱基的错配,该酶是没有校正功能的。TaqDNA聚合酶的碱基错配几率为2.1×10-4。
(1)TaqDNA聚合酶在高温下仍保持活性,因此在PCR扩增时可以________加入,________(填“需要”或“不需要”)再添加。
(2)影响PCR反应的影响因素除引物、反应温度、时间和TaqDNA聚合酶浓度外,从材料中可知,还应有________。
(3)这种嗜热细菌能够在热泉中生存,这是________的结果。
(4)PCR中由碱基错配引起的变异属于________。假设对一个DNA进行扩增,第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配,则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段,与原DNA相应片段相同的占________。
陈继明回答:
(1)一次性 不需要 (2)Mg2+浓度 (3)长期自然选择 (4)基因突变 1/2
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