问题标题:
跑totalRNAureapage用多大浓度的胶?浓度和电压求详细告知啊
问题描述:
跑totalRNAureapage用多大浓度的胶?
浓度和电压求详细告知啊
金林钢回答:
以bioradminiproteanIII为例.
8Murea,0.5xTBE,5%(1:19)bis-AA:AA.取10ml于15mlfalcontube,平衡到室温或37度.
加入100ul10%AP(过硫酸铵),4ulTEMED,颠倒混匀一分钟.
倒胶,插梳子,置于阳光下一个小时.
将300ml0.5xTBE预热到60度.
卸胶,取梳子,用ddH2O冲洗梳孔,用滤纸吸干孔内余液.
上电泳槽,用预热好的TBE进行预电泳,250v,20min.
PAGELoadingbuffer:80%deionedformamide,10mMEDTA,BPB&XCY.
将样品5ul与5ulloadingbuffer混合,70度五分钟.冷至4度,立即上样.
预电泳完毕,用1ml枪吹打PAG胶上样孔之urea,立即上样(不超过5ul,100ng-1ug).
250v电泳15-20min,至BPB正好走出.
卸下玻璃板,以ddH2O冲洗至温度降至室温.卸胶.
染色,EBorSYBRgoldorgelstarorsilverstain.
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