固体复合酶试剂法 　　（1）试剂空白酶溶液：取固体复合酶（酶活力测定方法见注1,活力应符合规定）60mg,用盐酸三乙醇胺缓冲液（取三乙醇胺17.5g,加水约200ml,加盐酸4ml,混匀,加乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解后,用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.6,加水稀释至250ml.滤过后4℃保存,一周内使用.）溶解并稀释至20ml.垂熔漏斗过滤,4℃保存,两天内使用. 　　测定酶溶液：取空白酶溶液10ml,加还原型辅酶Ⅰ（NADH）3.0mg,溶解后4℃保存,两天内使用. 　　（2）供试品溶液的制备取本品适量,精密称定,加水溶解并制成每1ml约含0.4mg（按无水物计)的溶液. 　　（3）测定法精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液2ml,测定酶溶液1ml,置石英吸收池中；另精密量取上述缓冲液2ml,空白酶溶液1ml置另一吸收池,作为空白,摇匀,静置15分钟,照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅣA）,在340nm波长处测定吸光度A1.各池再分别精密加入供试品溶液0.1ml,摇匀,于20℃～25℃放置10分钟,在340nm的波长处测定,直至吸光度基本不变,读取吸光度A2.求出吸光度差值ΔA（ΔA=A1－1.0333A2）,按下式计算,即得. 　　式中3.0为加入供试品溶液前样品池中溶液的体积（ml）； 　　6.29103为还原型辅酶Ⅰ(NADH)的摩尔吸收系数； 　　2为果糖二磷酸钠反应系数； 　　406.06为C6H11Na3O12P2的分子量； 　　0.1为供试品溶液加入体积(ml)； 　　W为供试品的取样量(mg)（以无水物计）. 　　混悬液酶试剂法 　　(1)试剂盐酸三乙醇胺缓冲液（0.4mol/L,pH7.6）：取盐酸三乙醇胺18.6g,加水200ml溶解,加乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解后,用2mol/L氢氧化钠溶液(约18ml)调节pH值至7.6,加水稀释至250ml.或取三乙醇胺17.5g,加水约200ml,加盐酸4ml,混匀,加乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解后,用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.6,加水稀释至250ml.滤过后4℃保存,一周内使用. 　　还原型辅酶Ⅰ（NADH）溶液：取NADH二钠盐7mg,溶于2ml盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6）中.4℃保存. 　　3-磷酸甘油脱氢酶-磷酸丙糖异构酶混悬液（GDH/TIM）：取3-磷酸甘油脱氢酶混悬液（GDH）与磷酸丙糖异构酶混悬液（TIM）适量,用3.2mol/L硫酸铵溶液（pH6）稀释成每1ml约含GDH310U和TIM1550U的溶液.4℃保存. 　　醛缩酶混悬液（ALD）：取醛缩酶混悬液（ALD）适量,用3.2mol/L硫酸铵溶液（pH6）稀释成每1ml中约含ALD90U的溶液. 　　（2）供试品溶液的制备取本品适量,精密称定,加水溶解并制成每1ml约含0.2mg（以无水物计）的溶液. 　　（3）测定法精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6）3.0ml,供试品溶液0.1ml,还原型辅酶Ⅰ溶液0.05ml,甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml,置1cm吸收池中,摇匀,放置15分钟；另取盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6）3.15ml,甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml,置另一吸收池中,摇匀,作为空白,照紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录ⅣA）,在340nm波长处测定供试品溶液的吸光度A1,再在每池中加醛缩酶混悬液0.02ml,摇匀,于20℃～25℃放置约5分钟,在340nm波长处测定供试品池的吸光度,直至吸光度基本不变读取吸光度A2.求出吸光度差值ΔA（ΔA=0.9937A1-A2）,按下式计算,即得. 　　果糖二磷酸钠（%）= 　　式中0.9937为3.17/3.19； 　　3.19为样品池中溶液的最终体积（ml）； 　　6.29103为还原型辅酶Ⅰ(NADH)的摩尔吸收系数； 　　2为果糖二磷酸钠反应系数； 　　406.06为C6H11Na3O12P2的分子量； 　　0.1为供试品溶液加入体积(ml)； 　　W为供试品的取样量(mg)（以无水物计）.