问题标题：
【如图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：（1）构建表达载体需要的酶是：___，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、___、___、终止子和复制原点等；构建表达载】
问题描述：
如图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：
（1）构建表达载体需要的酶是：___，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、___、___、终止子和复制原点等；构建表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中___，并可遗传给下代．
（2）提取Gfp基因时常用到PCR技术，PCR扩增目的基因时，首先要根据___合成引物；需要加入两种引物，原因是___，用两种引物才能确保DNA两条链同时被扩增．
乔良回答：
（1）构建表达载体时，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒；表达载体包含目的基因（绿色荧光蛋白基因Gfp）、标记基因、启动子、终止子和复制原点等．构建表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，表达和发挥作用，并可遗传给下代．
（2）提取Gfp基因时常用到PCR技术，PCR扩增目的基因时，首先要根据目的基因的核苷酸序列合成引物；DNA聚合酶只能从3'端延伸DNA链，因此需要加入两种引物才能确保DNA两条链同时被扩增．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶 标记基因 启动子 （这两空可以互换顺序） 稳定存在，表达和发挥作用
（2）目的基因的核苷酸序列 DNA聚合酶只能从3'端延伸DNA链
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