土壤DNA?土壤有DNA?土壤微生物?一样的,用土壤浸出液,照一样的流程 　　一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的.这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析,还可用于PCR的模板、文库构建等实验.2I+P7Y!xd/{3{ 　　根据材料来源不同,采取不同的材料处理方法,而后的DNA提取方法大体类似,但都应考虑以下两个原则： 　　1、防止和抑制DNase对DNA的降解. 　　2、尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏. 　　试剂准备： 　　1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8);1mMEDTA(pH8.0). 　　2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4);200mMNaCl;5mMKCl."`4{1T(G"f+D9@09g)e7y;O 　　3、裂解缓冲液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml.&Z1H,h:o(P7D 　　4、20%SDS6k8i)@+N5W-V$v;y#}2x 　　5、2mg/ml蛋白酶K2S9f$`)m/^4C 　　6、Tris饱和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿 　　7、无水乙醇、75%乙醇 　　试验步骤：!y)e%f(A;r;j+j 　　材料处理： 　　1、新鲜或冰冻组织处理：/$+@)v2h;a6G%w'K 　　1)取组织块0.3-0.5cm3,剪碎,加TE0.5ml,转移到匀浆器中匀浆..R%A.y5z-N 　　2)将匀浆液转移到1.5ml离心管中."F;k$S4J9_'q+Y2 　　3)加20%SDS25ml,蛋白酶K(2mg/ml)25ml,混匀.&^%[8p!u,H/xU#`%V(I 　　4)60°C水浴1-3hr. 　　2、培养细胞处理： 　　1)将培养细胞悬浮后,用TBS洗涤一次.0s*r)c:v1E 　　2)离心4000g×5min,去除上清液.#p3J.U,l.b7v!_ 　　3)加10倍体积的裂解缓冲液.2W4L%h/G4P2m6K 　　4)50-55°C水浴1-2hr. 　　DNA提取： 　　1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中,温和、充分混匀3min.3^(k#l,z.E!f5n%H.a 　　2、离心5000g×10min,取上层水相到另一1.5ml离心管中.;_4uw2t9K)f;C)]!a 　　3、加等体积饱和酚,混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中. 　　4、加等体积酚/氯仿,轻轻混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中.如水相仍不澄清,可重复此步骤数次.#u-t0}.d5J"z5y#o 　　5、加等体积氯仿,轻轻混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中.%q/3f,U8t9b 　　6、加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇,轻轻倒置混匀. 　　7、待絮状物出现后,离心5000g×5min,弃上清液. 　　8、沉淀用75%乙醇洗涤,离心5000g×3min,弃上清液. 　　9、室温下挥发乙醇,待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜