问题标题：
关于荧光实时定量PCR1.一定要在冰上操作吗?个人觉得没有必要啊!2.一般都使用双蒸水,使用超纯水可以吗?貌似结果不怎么样啊3.关于加样量的体系问题,只要保证引物的终浓度就可以而不用考
问题描述：
关于荧光实时定量PCR
1.一定要在冰上操作吗?个人觉得没有必要啊!
2.一般都使用双蒸水,使用超纯水可以吗?貌似结果不怎么样啊
3.关于加样量的体系问题,只要保证引物的终浓度就可以而不用考虑加的量,还是一定要保证体系中引物的量相同?举个例子：
引物1F1R,2F2R（双重定量）,保存的浓度都是20uM,引物1的终浓度应为1000nM,引物2的终浓度应为500nM,20ul体系,所以加引物1的量是1ul,引物2的量是0.5ul.
或者可以实验前先将引物2稀释为10uM,然后为了达到终浓度,引物1和引物2加的量就都为1ul.
请问,这两种方法有区别吗?哪种更好呢?
康涛回答：
最好还是在冰上做啦,一次两次没有问题,久了多了可能问题就出来了
一般用的是灭菌的双蒸水
保证引物的终浓度就可以.都是用水稀释的,没啥差别
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