问题标题:
【荧光定量PCR一定要用管家基因么?我的细胞5个孔药物浓度分别是0(0.5%FBS的)、20uM、40uM、60uM、0(10%FBS的)、都是双复孔的.那最终加在荧光定量PCR仪中需要加那些体系?标准品梯度的】
问题描述:
荧光定量PCR一定要用管家基因么?我的细胞5个孔药物浓度分别是0(0.5%FBS的)、20uM、40uM、60uM、0(10%FBS的)、都是双复孔的.那最终加在荧光定量PCR仪中需要加那些体系?标准品梯度的体系还有上面的五个cDNA?管家基因体系是怎么加的?
郭朝辉回答:
管家基因是用来做对照的,它表达量恒定,这样你可以通过比较它和你的基因,做出标准化的数值,所有定量必须带有管家基因才能排除干扰.
杜鷁回答:
我知道管家基因是什么。就是不知道管家基因用单独的一个体系进行PCR所用的待测的cDNA?我上面要做四个浓度的还有个正常的。那要多少个管家体系呢?
郭朝辉回答:
对的,单独测,管家基因当一个正常基因来测定,一种样品测一次
杜鷁回答:
那我上面五个浓度就意味着我需要再检测五个管家基因?然后双复孔的话就是要检测10个管家基因?是不是把每个浓度提取出来的RNA分成两份,一份测待测的,一份测管家的?
郭朝辉回答:
对的,完全正确
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