问题标题:
【(2014•惠安县模拟)人外周血单核细胞能合成白介素2(IL-2),是含有113个氨基酸残基的糖蛋白,该蛋白可增强机体免疫功能,但在体内易被降解.研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白(HSA)】
问题描述:
(2014•惠安县模拟)人外周血单核细胞能合成白介素2(IL-2),是含有113个氨基酸残基的糖蛋白,该蛋白可增强机体免疫功能,但在体内易被降解.研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一个融合基因,并在受体细胞中表达,获得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白.其技术流程如图.请回答:
(1)培养人外周血单核细胞时,需要通入______(气体);图中②表示______过程.
(2)位点a应能被______限制酶切割.为了使融合基因能够完整表达出所需产物,应将表达载体2导入的受体细胞是______(填大肠杆菌或酵母菌).
(3)检测工程菌是否合成了IL-2-HSA融合蛋白,应采用______方法.
李永旭回答:
(1)动物细胞培养所需要的条件是:95%空气和5%CO2气体环境、适宜温度(37℃)和PH、无毒无菌的环境及合适的营养成分,其培养基中通常需加入血清、血浆等一些天然成分;图中②mRNA→cDNA,表示逆转录过程.
(2)目的基因IL-2cDNA和表达载体1在构建表达载体2时需先用限制酶切割让二者获得相同的黏性末端,然后在DNA连接酶的作用下重新组合.根据目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ,所以表达载体1也必须有这两个酶切位点,而表达载体1上已有EcoRⅠ,因此位点a应被BglⅡ限制酶切割.
(3)应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白.
故答案为:
(1)O2和CO2 逆转录
(2)BglⅡ酵母菌
(3)抗原-抗体杂交
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