问题标题:
科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图1:(1)步骤①的技术名称是___.(2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有___
问题描述:
科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图1:
(1)步骤①的技术名称是___.
(2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有___.
(3)步骤③中,需要构建含有干扰素基因的___.由于DNA复制时,子链只能由5′向3′方向延伸,故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时,可以从图2A、B、C、D四种单链DNA片段中选取___作为引物.对干扰素基因片段和质粒进行酶切时,可选用限制酶的组合为___或___.
(4)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察,选择发___色荧光的细胞进行体外诱导.为检测干扰素基因是否表达,可以采用___的方法.
马慧莲回答:
(1)核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中,所以实验前要去除卵母细胞的细胞核.
(2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有全能性.
(3)步骤③是将目的基因导入ES细胞,该过程之前需要构建基因表达载体;DNA复制只能从5’到3’,因此构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时,可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B和C作为引物.由图可知,SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上,用该酶切割会破坏目的基因,因此对干扰素基因片段和质粒进行酶切时,可选用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ.
(4)用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割时会破坏红色荧光蛋白基因,但不会破坏绿色荧光蛋白基因,因此将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察,选择发绿色荧光的细胞进行体外诱导.为检测干扰素基因是否表达,可以采用抗原-抗体杂交法.
故答案为:
(1)细胞核
(2)ES细胞具有全能性
(3)基因表达载体 B和C HindⅢ和PstⅠEcoRⅠ和PstⅠ
(4)绿 抗原-抗体杂交
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