问题标题:
研究者根据果蝇X染色体上红眼基因B设计出sgRNA,导入果蝇早期胚胎细胞,“敲除”部分胚胎细胞中的红眼基因B,得到镶嵌体果蝇(即复眼中部分小眼呈红色,部分小眼呈白色),如下表.
问题描述:
研究者根据果蝇X染色体上红眼基因B设计出sgRNA,导入果蝇早期胚胎细胞,“敲除”部分胚胎细胞中的红眼基因B,得到镶嵌体果蝇(即复眼中部分小眼呈红色,部分小眼呈白色),如下表.
胚胎存活率(%) | 16 | 11 | 8 | 6 | 7 | 3 |
镶嵌体果蝇比例(%) | 0 | 0 | 10 | 17 | 50 | 86 |
(2)如图所示,敲除基因时,sgRNA与红眼基因B的部分序列互补配对,细胞内的Cas9酶在配对区域定点剪切,引起红眼基因B发生碱基对___,导致基因突变.该过程中,sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA的作用类似于___酶的作用,敲除后需要___酶对DNA上的切口进行修复.
(3)若研究者要通过测交实验验证镶嵌体雄果蝇的基因组成,应将镶嵌体雄果蝇与表现型为___的果蝇进行杂交,预期杂交后代的表现型是___.
(4)这种定点敲除基因的方法为艾滋病的治疗提供了一个思路.HIV通过识别膜蛋白C侵入宿主细胞,研究者可以根据___的核苷酸序列设计sgRNA,导人骨髓___细胞中,有效阻止HIV侵染新分化生成的T淋巴细胞.
罗承沐回答:
(1)根据实验表格数据结果分析,sgRNA的导入降低了果蝇胚胎的存活率.表格中只有sgRNA浓度为500和1000的两组中镶嵌体果蝇比例,而500浓度的一组胚胎成活率高,因此若要从相同数量的早期胚胎中获得数量最多的镶嵌体果蝇,应选用的sgRNA浓度为500ng/mL.
(2)分析敲除过程图示可知,敲除基因时,sgRNA与红眼基因B的部分序列互补配对,细胞内的Cas9酶在配对区域定点剪切,引起红眼基因B发生碱基对缺失,导致基因突变.该过程中,sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA的作用类似于限制(或“限制性核酸内切”)酶的作用,敲除后需要DNA连接酶对DNA上的切口进行修复.
(3)题干中提出,“敲除”部分胚胎细胞中的红眼基因B,得到镶嵌体果蝇(即复眼中部分小眼呈红色,部分小眼呈白色),因此研究者要通过测交实验验证镶嵌体雄果蝇的基因组成,应将镶嵌体雄果蝇与表现型为白眼雌性的果蝇进行杂交,预期杂交后代的表现型是红眼雌性、白眼雌性、白眼雄性.
(4)HIV通过识别膜蛋白C侵入宿主细胞,研究者可以根据膜蛋白C基因的核苷酸序列设计sgRNA,导人骨髓造血干(或“淋巴干”)细胞中,有效阻止HIV侵染新分化生成的T淋巴细胞.
故答案为:
(1)降低 500
(2)缺失 限制(或“限制性核酸内切”) DNA连接
(3)白眼雌性 红眼雌性、白眼雌性、白眼雄性
(4)膜蛋白C基因 造血干(或“淋巴干”)
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