问题标题：
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程
问题描述：
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：
（1）利用PCR技术扩增鱼的抗冻蛋白基因，向反应的试管中添加模板DNA、四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）、___和___．
（2）基因工程的核心是___，进行这项操作时，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶___同时对含鱼抗冻蛋白基因的DNA和质粒进行切割，切割后用___ 酶处理．
（3）研究人员通常采用___法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内．在培养基中的添加___，来筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，筛选后，为了进一步确定是否含目的基因，用___方法检测是否有目的基因．通常采用___技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，在这项技术中的鱼的抗冻蛋白是___．
贾文君回答：
（1）利用PCR技术扩增DNA时所需的条件：引物、模板DNA、原料（4种脱氧核糖核苷酸）、引物和耐热性的DNA聚合酶等．
（2）基因工程的核心是构建基因表达载体，在构建基因表达载体中，如果目的基因和载体用同一种限制酶切割，获得的黏性末端相同，将会发生目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接（或目的基因自连、质粒自连），故应选用不同的限制酶分别对目的基因和载体切割，以获得不同的黏性末端．由于AluⅠ酶的切割位点存在于目的基因的中央，因此不宜选用AluⅠ酶，则应选用PstⅠ和SmaⅠ对含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒进行切割．切割后用DNA连接酶处理，构建基因表达载体．
（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，在培养基中的添加氨苄青霉素，来筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，筛选后，为了进一步确定是否含目的基因，用DNA分子杂交方法检测是否有目的基因．在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，通常采用抗原-抗体杂交技术，在这项技术中的鱼的抗冻蛋白是抗原．
故答案为：
（1）引物 热稳定DNA聚合酶
（2）构建基因表达载体 PstⅠ、SmaⅠDNA连接酶
（3）农杆菌转化（或基因枪法等，答案合理即给分） 氨苄青霉素 DNA分子杂交 抗原-抗体杂交 抗原
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