“基因敲除”是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术，该技术采用基因工程等手段使模型动物体内的某一基因失去功能，以研究该基因在生物个体发育和病理过程中的作用．例如基因型为BB的小鼠，要敲除基因B，可先用体外合成的突变基因b取代正常基因B，使BB细胞改变为Bb细胞，最终培育成为基因敲除小鼠．请回答：

（1）基因工程的核心步骤是___，基因b是否导入受体细胞，可利用重组质粒上的___检测．

（2）利用PCR技术扩增目的基因时，在反应体系中需要加入___、引物、___酶、脱氧核苷酸、缓冲液等

（3）题中获得的基因敲除小鼠，___（填“能”或“不能”）直接用来研究B基因的功能，原因是___．

（4）目的基因与载体结合过程中需要限制性核酸内切酶和___酶．已知限制性核酸内切酶的识别序列和切点是-G→GATCC-，请画出目的基因被该限制性核酸内切酶切割后形成的黏性末端___．