问题标题:
我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛,下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图.图中质粒表示基因工程中经常选用的载体-pBR322质粒,Ampr表示青霉素抗性基因,Tetr表示四
问题描述:
我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛,下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图.图中质粒表示基因工程中经常选用的载体-pBR322质粒,Ampr表示青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因.根据上图回答下列问题(限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同):
(1)过程②必需的酶是___,过程④必需的酶是___.⑤过程中为提高成功率,常用___溶液处理大肠杆菌.
(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割,用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时,则形成的DNA片段共___种,其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是___.
(3)如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322,完成过程④、⑤后,将三角瓶内的大肠杆菌(不含Ampr、Tetr抗性质粒)先接种到甲培养基上,形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落,分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上,一段时间后,菌落的生长状况如图所示.接种到甲培养基上的目的是筛选___的大肠杆菌,含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态是___.
石波回答:
(1)过程②人生长激素信使RNA形成cDNA,表示逆转录,需要逆转录酶;过程④质粒和基因连接形成重组质粒.需要DNA连接酶发挥作用;⑤过程为转化,需要CaCl2使大肠杆菌处于易于吸收外界DNA的感受态.
(2)PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ分3种酶分别用1,2,3表示,一种酶酶切时,一共可以得到3种不同长片段;两种酶酶切时,可得到1-2,2-1,2-3,3-2,1-3,3-1六种片段;三种酶酶切,可得到1-2,2-3,3-1三种片段,与前面重复,因此一种可形成9种片段,其中含有完整四环素抗性的有3种,单独用1酶切,单独用2酶切,1和2同时酶切得到的片段,占总数的13
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