问题标题:
如图是转基因小鼠的培育过程示意图,Gfp是绿色荧光蛋白基因,请分析回答:(1)过程①需要用到___酶.过程②将目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是___培养胚胎干细胞的培养液中除加
问题描述:
如图是转基因小鼠的培育过程示意图,Gfp是绿色荧光蛋白基因,请分析回答:
(1)过程①需要用到___酶.过程②将目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是___培养胚胎干细胞的培养液中除加人各种营养物质外,通常还需加入___
(2)表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、___、___、终止子和复制原点等
(3)自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或___中分离出来的一类细胞胚胎干细胞在形态上表现为体积小,细胞核大,细胞核仁明显;在功能上具有___性
(4)图中载体上的Neo基因是B抗生素抗性基因,图中步骤③所用的G418是B抗生素(对细胞有毒害作用),培养液添加G418的目的是___
(5)图中步骤⑤要将细胞注射入囊胚的___位置;步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理,目的是___
(6)检测目的基因是否翻译成蛋白质,可从小鼠c体内提取蛋白质,用___杂交的方法加以检测.
鹿旭东回答:
(1)①为基因表达载体的构建,是转基因技术的核心步骤,需要限制酶切割目的基因和载体,同时需要DNA连接酶链接形成重组DNA.受体细胞是动物细胞,常用显微注射法将目的基因导入胚胎干细胞.早期胚胎培养过程在使用合成培养基进行培养时,除了水、无机盐、氨基酸,葡萄糖、还要加入动物血清等天然成分.
(2)为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达,需要构建重组表达载体,重组表达载体包括复制原点、启动子、终止子、目的基因、标记基因等.
(3)胚胎干细胞简称ES或EK细胞,来源于早期胚胎或原始性腺(即囊胚期的内细胞团).具有胚胎细胞的特性,体积较小,细胞核大,核仁明显;在功能上,具有发育的全能性,可分化为成年动物任何一种组织细胞.另一方面,在体外培养条件下,ES细胞可不断增殖而不发生分化,可进行冷冻保存,也可以进行某些遗传改造.
(4)G418是B抗生素(对细胞有毒害作用),培养液添加G418的目的是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来.常用的标记基因是抗生素基因.
(5)图中步骤⑤要将细胞注射入囊胚的内细胞团,内细胞团以后发育成胚胎,步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理,目的是使其同期发情,有相同的生理基础.
(6)检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原-抗体杂交.
故答案为:
(1)DNA连接酶 显微注射法 血清(血浆)
(2)标记基因 启动子
(3)原始性腺 发育的全能
(4)筛选出导入目的基因的胚胎干细胞
(5)内细胞团 使其同期发情
(6)抗原-抗体
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