问题标题:
铁硫簇是一种氧化还原蛋白,它参与电子传递、基因表达和调控等重要过程.嗜热杆菌铁硫簇中有三种关键蛋白SufB、SufC、SufD,为研究三种蛋白能否相互作用,科研人员做了如图的研究.(1
问题描述:
铁硫簇是一种氧化还原蛋白,它参与电子传递、基因表达和调控等重要过程.嗜热杆菌铁硫簇中有三种关键蛋白SufB、SufC、SufD,为研究三种蛋白能否相互作用,科研人员做了如图的研究.
(1)微生物培养过程中,若实验室保存的嗜热杆菌被大肠杆菌污染,可将菌种接种到LB细菌通用培养基上后,___,将嗜热杆菌筛选出来.
(2)提取嗜热杆菌基因组作为体外扩增的___,加入___种不同的引物,扩增出蛋白SufB、SufC、SufD的基因,作为目的基因.
(3)为获得sufBC融合基因,需要选择图1中的___端,使其带上相同的酶切位点后,利用___获得sufBC融合基因.
(4)图2中将构建好的重组质粒sufBC-PET28a导入受体细胞X.受体细胞最好选择___(酵母菌或大肠杆菌).
(5)筛选含有目的基因的受体细胞X扩大培养,并诱导其表达融合蛋白SufBC.将融合蛋白与固体基质相连,再加入SufD蛋白,混合摇匀,然后洗去未结合的SufD蛋白.最后将固体基质上的蛋白洗脱下来进行电泳,结果如图3所示,这说明___.
李金方回答:
(1)分析题意可知,嗜热杆菌适宜生存在高温条件下,而其它微生物在高温条件不能生存,因此微生物培养过程中,若实验室保存的嗜热杆菌被大肠杆菌污染,可将菌种接种到LB细菌通用培养基上后高温培养,将嗜热杆菌筛选出来.
(2)提取嗜热杆菌基因组作为体外扩增的模板,由于每种基因扩增均需要两种因为,因此共需要加入6种不同的引物,扩增出蛋白SufB、SufC、SufD的基因,作为目的基因.
(3)为获得sufBC融合基因,应将B基因的末端和C基因的首端进行连接,即需要选择图1中的b、c端,使其带上相同的酶切位点后,利用限制酶和DNA连接酶获得sufBC融合基因.
(4)由于嗜热杆菌属于原核生物,因此为保持目的基因的表达产物生物活性基本保持不变,因此图2中受体细胞X最好选择大肠杆菌.
(5)分析图3,实验组和2、3两组实验比较,虽然实验组洗去未结合的SufD蛋白,但是电泳结果中仍然出现SufBC融合蛋白和SufD蛋白,说明SufBC融合蛋白和SufD蛋白有相互作用.
故答案为:
(1)高温培养
(2)模板 6
(3)b、c 限制酶和DNA连接酶
(4)大肠杆菌
(5)SufBC融合蛋白和SufD蛋白有相互作用(这一作用较弱)
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