问题标题:
【请问如何解读基因工程载体图谱?比如说基因载体有很多种,其基本特点是什么?】
问题描述:
请问如何解读基因工程载体图谱?比如说基因载体有很多种,其基本特点是什么?
范长伟回答:
载体一般具备三个特点:1、独立自主的复制能力;2、具有可筛选的标记;3、容易转化和提取.
载体的基本要素:1、复制起始位点ori,用以质粒的自我复制;2、筛选标记,如抗性基因,便于筛选;3、多克隆位点MCS,用以插入外源基因.
特殊载体的特殊元件:如用于基因表达的启动子、终止子、融合表达蛋白纯化标签基因等等.
识别载体图谱步骤:1、看复制起始位点ori,了解质粒的类型(原核、真核、穿梭);2、看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记;3、看多克隆位点MCS,看如何选择限制性内切酶切割位点以插入外源基因;4、看是否还有特殊元件,如用于基因表达的启动子、核糖体结合位点、转录终止信号,以判断质粒是否能够用于基因表达;5、质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针,那其
实是代表DNA的两条链,即质粒是环状双链,它的启动子等在其中一条链上,而它的抗性基因在另一条链上.
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