问题标题:
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗,其技术流程如图(图中数字序号表示的是相关过程).请回答下列有关问题
问题描述:
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗,其技术流程如图(图中数字序号表示的是相关过程).请回答下列有关问题:
(1)过程②利用的技术是___,过程③中涉及到了基因工程技术,其中作为受体细胞的是___.
(2)过程③中获取的目的基因是___,可以根据该基因的___设计引物,利用PCR技术扩增目的基因片段.按此方法和图示技术流程,完成Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有限制性酶核酸内切酶、DNA连接酶和___等.
(3)图中造血干细胞中的遗传物质至少有___个来源.为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的___,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.图中所述克隆技术属于___性克隆.
柯文鸿回答:
(1)过程②利用的技术是早期胚胎培养,过程③中涉及到了基因工程技术,其中作为受体细胞的是 ES细胞.
(2)图示利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗,可推知过程③中获取的目的基因是(正常的)Rag2基因.步骤③中,在构建含有Rag2基因的表达载体时,可以根据Rag2基因的脱氧核苷酸序列设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段.分离、培养ES细胞过程中需要用胰蛋白酶分散细胞.PCR技术扩增过程中用耐高温的DNA聚合酶(Taq酶).基因导入过程中需要用限制性酶核酸内切酶、DNA连接酶.
(3)图中造血干细胞中的遗传物质至少有3个来源:上皮细胞、卵母细胞和Rag2基因.为检测Rag2基因的表达情况,可采用抗原-抗体杂交法,即提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质(抗原),用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.根据图形分析可知:基因导入在体外进行的,因此,该治疗方式属于体外基因治疗.图中所述克隆技术也属于治疗性克隆.
故答案为:
(1)早期胚胎培养 ES细胞
(2)(正常的)Rag2基因 脱氧核苷酸序列(或碱基对序列或遗传信息) 胰蛋白酶、耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)
(3)三 蛋白质 治疗
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