实际上我个人一直认为,保护碱基只要按照模板延长几个就好了.并不是说一定需要特定的碱基才可以.唯一要避免的就是,重复碱基,或者是会导致引物二聚体的碱基.我们以前都是看一下要几个,然后直接根据已有的模板去设计的,没有选择过特定的碱基. 　　这个酶要求不高,如下所示,只要保护碱基在2-5个,可以保证酶切活力在50-100%,所以设计5-6个基本上是万无一失了. 　　bpfromtherecognitionsitetofragmentend 　　12345 　　0-2050-100