石蜡切片法——固定与包埋 　　一、实验目的 　　掌握石蜡切片法中固定、透明与包埋的基本操作步骤及要点. 　　二、实验材料 　　党参、秦艽或其它药材的根 　　三、实验用具及试剂 　　福尔马林-酒精-醋酸混合固定液(简称FAA)、各级酒精溶液、二甲苯、石蜡（熔点52～54℃）、恒温箱、电热板、解剖针等. 　　四、实验内容与步骤 　　1．取材 　　取培养在花盆中或药用植物园中的党参根或秦艽根,用水冲去附在其上的木屑或泥土,切成5mm长的小段(亦可用带侧根的部分). 　　2．固定 　　FAA固定液中固定24h以上. 　　3．脱水 　　将FAA固定液倒出后,转入70%酒精中浸泡1h后,再顺次转入83%和95%酒精中各2h,然后转入纯酒精中2～3h（中间换一次). 　　4．透明 　　等量纯酒精及二甲苯中2h,二甲苯2h(中间换一次). 　　5．透蜡 　　将已经透明的材料和二甲苯一起倒入包埋用的小杯中,此时可把写好的标签投入二甲苯中,然后轻轻倒入溶解的石蜡(熔点为52～54℃),这样,石蜡就在二甲苯的上层凝固起来.小杯放在35～37℃的熔蜡炉内,使石蜡徐徐溶解到饱和为止,约需l～2d. 　　6．包埋 　　先将小杯移入56～60℃的恒温箱内(温度宜较石蜡熔点高3℃),待石蜡熔化后,倒去含二甲苯的石蜡,换以熔化的纯石蜡,以后每隔lh左右换纯蜡一次,材料在恒温箱中的时间视不同材料而异,约为2～5h,共换纯蜡2～3次,即可进行包埋. 　　包埋时,先用道林纸摺成适当大小的纸盒,放在已经加热的电热板上.然后右手持解剖执针,左手从温箱中取出盛满石蜡的小杯,随手将温箱关好,迅速把石蜡连同材料和标签一起倒入纸盒中,再用烤热的解剖针轻轻拨动材料使之排列整齐.如发现材料附近有石蜡的凝块,则需用热针熔去,同时使标签上有字的一面朝外,以便识别.稍停,待盒中石蜡凝到不致动摇材料时,就将纸盒轻轻放入冷水中使它迅速凝固.半h后,即可取出贮藏备用. 　　五、实验注意事项 　　1．在材料选择和切割时应注意下列问题： 　　（1）选取新鲜、无病虫害并具代表性的材料； 　　（2）先作徒手切片或剥离检查,决定适宜的材料,立即固定； 　　（3）注意按季节和植物生长发育不同阶段取材； 　　（4）材料大小要适当. 　　2．固定时应注意的问题： 　　（1）标签的填写 　　必须将标签纸贴于标本瓶上,并写上以下内容：编号、采集时间、地点、处理者姓名.另外,在实验记录本上表明编号的详细情况：何种植物的何种器官,是横切还是纵切,用的是何种固定液等等. 　　（2）固定液的选择 　　根据所用材料的不同,选择不同的固定液.一般,各种器官,不论是根、茎、叶,还是花和果实,其组织切片均用FAA固定液,而根尖、茎尖、花药等材料的压片（非切片法）用卡诺固定液. 　　（3）材料体积的影响 　　对于微小材料可直接投入固定液,对于较大材料,则须将其先解剖成较小材料,再迅速投入固定液.若材料外部超过固定液上线,达不到固定作用时,应须立即放入渗透力很强的固定液中,如醋酸酒精溶液；或利用超声波发生器处理数min. 　　（4）多毛芽或根茎的固定 　　对多毛的芽或根茎固定时,须先投入渗透能力很强的醋酸酒精溶液中数分钟,然后再投入其它固定液中固定.必要时配合抽气装置,其意义在于使固定液尽快渗入材料内部,并排除材料内气泡的干扰. 　　3．脱水时的注意事项 　　（1）脱水从低浓度开始逐渐替换高浓度酒精,否则发生细胞收缩. 　　（2）从同浓度（保存液中）酒精开始.例FAA从70%或50%酒精开始.注意要加盖,各级酒精停留时间因材料而定. 　　4．透明时的注意事项 　　（1）使用时材料必须脱尽水分,否则发生乳状混浊. 　　（2）要避免材料收缩