问题标题:
那个内切酶切出来的粘性末端是单个的A方便TA克隆?如果没有的话怎么改造成这样?普通taq酶PCR产物加单个A尾,载体上应该是加单个T才对
问题描述:
那个内切酶切出来的粘性末端是单个的A方便TA克隆?
如果没有的话怎么改造成这样?
普通taq酶PCR产物加单个A尾,载体上应该是加单个T才对
陈毓回答:
限制性内切酶识别的序列都是回文序列,所以不可能切出两头都是单个A的粘性末端.
可行的方法是用平端酶酶切如EcoRV、SmaI等,然后用taq酶和dATP(dNTP)将平端后面加个A(体系可以参考普通PCR体系),片断纯化后就可以进行TA克隆
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