问题标题：
科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达．如图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程．请据图回答：（1）步骤①和②中常用的工具酶是
问题描述：
科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达．如图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程．请据图回答：
（1）步骤①和②中常用的工具酶是___和___．
（2）图中质粒上有抗氨苄青霉素和抗四环素两个标记基因，经过①和②步骤后，有些质粒上的___基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒，由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活．
（3）步骤③是___的过程，为了促进该过程，应该用___处理大肠杆菌．
（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选___，能在C中生长的大肠杆菌有___类．
（5）步骤⑤：用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示．含目的基因的菌落位于___（D、E）上，请在图中相应的位置上圈出来．___．
黄仲明回答：
（1）用限制酶将质粒切割开形成黏性末端，用DNA连接酶将目的基因与质粒连接起来．
（2）质粒的实质是环状DNA，基本组成单位是脱氧核苷酸；由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中．
（3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入大肠杆菌（受体细胞）．为了促进该过程，用Ca2+处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞．
（4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长的大肠杆菌有两种，分别是含有抗四环素基因、同时抗四环素基因和含氨苄青霉素基因的大肠杆菌．
（5）D培养基中大肠杆菌能抵抗四环素和含氨苄青霉素，而E中只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌，结果如图：
故答案为：
（1）限制酶 DNA连接酶
（2）脱氧核苷酸 氨苄青霉素抗性
（3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆 菌（受体细胞） Ca2+
（4）2
（5）E 如下图所示（两点全圈出给分）．
（1）限制酶 DNA连接酶
（2）氨苄青霉素抗性
（3）将重组质粒导入大肠杆菌（受体细胞） Ca2+
（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌 2
（5）E
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