根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图：

为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA 除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 。

（2）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即　DNA连接酶和　DNA连接酶。

（3）基因工程中除质粒外，　 和也可作为运载体。

（4）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，应先用 处理大肠杆菌。