问题标题：
【DNA大小和PAGE浓度的问题我想扩1K到2K的片段,实验室条件有限,没有凝胶成像仪,所以想跑PAGE胶,和做SSR的方法一样吗?胶浓度一般多少?】
问题描述：
DNA大小和PAGE浓度的问题
我想扩1K到2K的片段,实验室条件有限,没有凝胶成像仪,所以想跑PAGE胶,和做SSR的方法一样吗?胶浓度一般多少?
胡和平回答：
可以,一样,9025,不用谢
胡和平回答：
我要扩增一个片段为2100bp的cDNA
我的目的基因是来自柑橘的基因,柑橘基因组已经发布了.设计引物时,直接选基因cds全长的头尾14-22bp,正反引物的GC比例尽量保持一致了.
我的扩增条件是:
模板2ul(模板浓度约为500ng)
正反引物为0.2ul
buffer2ul
dNTP2ul
Mgcl21.2ul
Taq酶0.2(我师兄建议我在真正扩增时需选择高保真酶如pfu)
ddH2O2调到20ul体系
PCR条件
94度4min
94度30秒
55度30秒
72度2:10分
30个循环
72度10分
4度半小时
按照以上的程序,我对6个目的基因(大小在都在2kB左右)扩增了好几次都没有明显的带出来或者带很弱,而有一个基因出现了三条非常弱的带?求助高手!!!
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